‌乳酸脫氫酶（LDH）活性微量法測定的原理‌是通過檢測LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過程中NADH的生成量來間接測定LDH的活性。

具體過程如下：

‌反應(yīng)原理‌：在LDH的作用下，NAD+被還原生成NADH。NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色，從而進(jìn)行比色測定（λmax=450 nm）‌。

‌反應(yīng)條件‌：LDH將NAD還原為NADH，NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色。這個(gè)反應(yīng)在冰上避光進(jìn)行，各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在實(shí)驗(yàn)前從冰箱中取出并平衡至室溫，整個(gè)過程需避光操作‌。

‌吸光度測量‌：在450 nm波長下測量吸光度，吸光度與LDH活性成正比，可以通過比色法測定LDH的活性‌。

‌實(shí)驗(yàn)步驟和所需設(shè)備‌：

‌實(shí)驗(yàn)步驟‌：準(zhǔn)備工作液（1×Assay Buffer、NAD、WST-8、Enhancer和Lactate混合均勻），將工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中，加入待測樣品，37℃恒溫孵育一定時(shí)間后測量吸光度‌。

‌所需設(shè)備‌：酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)（能測450 nm處的吸光度）、恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)、96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭、去離子水、勻漿器（如果是組織樣本）‌。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)‌：

‌試劑保存‌：各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在冰上避光保存，避免反復(fù)凍融‌。

‌操作注意事項(xiàng)‌：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程需在冰上避光進(jìn)行，避免光照影響結(jié)果‌。